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免疫組化/熒光

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肌纖維分型染色試劑盒(熒光標記法)

貨號:G1227-100T

品牌:Servicebio

價格:¥3000

規格:

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  產品簡介:

  肌纖維可以分為慢肌纖維(Slow Skeletal Myosin)和快肌纖維(Fast Myosin Skeletal)兩大類。這兩類肌纖維因其內部構造不同,功能上有很大差異??旒±w維又稱II型纖維、白肌纖、快解醣纖維或快縮肌纖維,屬于運動性運動神經單位,快肌纖維含較多的肌原纖維,運動時收縮的速度快而有力,爆發力強,但持久力較差??旒±w維主要由無氧代謝提供短期能量。慢肌纖維也叫I型纖維、紅肌纖維、慢氧化纖維。慢肌纖維收縮速度慢、收縮力量小,在力量與爆發力方面遜色與快肌纖維, 但持續時間長、不易疲勞,主要靠有氧代謝產生的三磷酸腺苷供能。

  本試劑盒使用不同的抗體分別標記慢肌纖維和快肌纖維,可實現I型肌纖維和II型肌纖維的分型。


  包裝內容:

產品貨號 產品名稱 規格
G1227-1 Rabbit Anti-Fast Myosin Skeletal Heavy chain antibody 50 μL
G1227-2 Mouse Anti-Slow Skeletal Myosin Heavy chain antibody 50 μL
G1227-3 CY3標記山羊抗兔IgG 25 μL
G1227-4 Alexa Fluor® 488標記山羊抗小鼠IgG 25 μL
G1227-5 抗熒光淬滅封片劑 5 mL
 

  保存條件:

  整套試劑-20℃避光保存,有效期12個月。


  客戶自備試劑:(以下試劑均可向本公司購買)

  1.抗原修復緩沖液(pH 6.0),貨號G1201/G1202。

  2.PBS (pH 7.2-7.4),貨號G0002。

  3.牛血清白蛋白(BSA),貨號G5001。

  4.DAPI,貨號G1012。

  5.組織自發熒光淬滅劑,貨號G1221。


  使用方法:

  1、石蠟切片脫蠟至水:依次將切片放入二甲苯Ⅰ15 min-二甲苯Ⅱ15 min-無水乙醇Ⅰ5 min-無水乙醇Ⅱ5 min-85%酒精5 min-75%酒精5 min-蒸餾水洗。

  2、抗原修復:組織切片置于盛滿檸檬酸抗原修復緩沖液(pH 6.0)的修復盒中于微波爐內進行抗原修復。中火8 min至沸,?;? min,再轉中低火7 min,,此過程中應防止緩沖液過度蒸發,切勿干片。自然冷卻后將玻片置于PBS中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5 min。

  3、畫圈血清封閉:切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈(防止抗體流走),甩干PBS,滴加BSA,封閉30 min。

  4、加一抗(兩種一抗混合孵育):Anti-Fast Myosin Skeletal Heavy chain antibody(稀釋比1:100-1:200)和Anti-Slow Skeletal Myosin Heavy chain antibody(稀釋比1:100-1:200),兩種一抗,按照一定的稀釋比例進行混合配制并混勻,輕輕甩掉切片上的封閉液,在切片上滴加稀釋好的一抗,切片平放于濕盒內4°C孵育過夜。(濕盒內加少量水防止抗體蒸發)

  5、加二抗(兩種二抗混合孵育):玻片置于PBS中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。CY3標記山羊抗兔IgG(稀釋比1:400);Alexa Fluor®488標記山羊抗小鼠IgG(稀釋比1:400),兩種二抗按照稀釋比例進行混合配制并混勻。 切片稍甩干后在圈內滴加二抗覆蓋組織,避光室溫孵育50 min。

  6、DAPI復染細胞核:玻片置于PBS中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后在圈內滴加DAPI染液,避光室溫孵育10 min。

  7、淬滅組織自發熒光:玻片置于PBS中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。在圈內加入自發熒光淬滅劑5min,流水沖洗10min。

  8、封片:切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。

  9、鏡檢拍照:切片于熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。(DAPI紫外激發波長330-380 nm,發射波長420 nm,發藍光;Alexa Fluor®488激發波長465-495 nm,發射波長515-555 nm,發綠光;CY3激發波長510-560,發射波長590 nm,發紅光)

  10、石蠟切片免疫熒光結果判讀

  DAPI染出來的細胞核在紫外的激發下為藍色,陽性表達為相應熒光素標記的紅光和綠光,紅光為Fast Myosin Skeletal Heavy chain antibody的表達,綠光為Slow Skeletal Myosin Heavy chain antibody的表達。


  注意事項:

  1.實驗操作應避光進行(暗環境),操作過程中避免組織干片;

  2.試劑現配現用,PBS洗滌要充分,減少非特異性著色;

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